深入探讨TG1电击感受态细胞:构建高效转化平台的关键要素
在科研实验中,TG1电击感受态细胞因其独特的特性在基因工程中扮演着重要角色。这是一种特别设计用于电击转化的E. coli K-12菌株,以其惊人的生长速度和广泛的噬菌体展示应用而闻名。其基因型[F’ traD36 proAB lacIqZ M15] supE thi-1 (lac-proAB) (mcrB-hsdSM)5(rK–mK–)揭示了它的特性和功能。
值得注意的是,TG1电击感受态细胞专为电击转化设计,不适用于热激转化。lacIqZ M15的存在使得它在蓝白斑筛选等实验中大显身手,同时,它也是构建普通质粒的理想工具。然而,由于缺乏核酸酶endA1突变,它的核酸酶含量相对较高,因此在提取质粒时,建议使用去蛋白的质粒提取试剂,以清除菌体内的酶活性。
AngYuBio-TG1电击感受态细胞的优越性能
AngYuBio的产品在噬菌体展示文库构建中表现出色,其电击效率超过0.5×1010cfu/μg DNA,得益于其独特的生产工艺。这样的高转化效率,无疑为科研人员提供了高效且可靠的实验平台。
操作指南:细致入微的转化步骤
操作TG1电击感受态细胞时,需要遵循严格的步骤,确保转化的成功。首先,确保电极杯彻底干燥并冷却至冰点。接着,将电击感受态细胞与目的DNA(质粒或连接产物)混合,务必避免气泡产生。在设置电转仪参数时,务必按照BioRad的推荐参数进行,如C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV。电击完成后,立即用无菌培养基S.O.C.稀释并复苏细胞,最后进行涂布和培养。
关键注意事项:提升转化效率和安全性
在操作过程中,需要注意几点关键事项。DNA加入量应控制在感受态体积的1/10以内,以防止电击压力过大。避免气泡,它们可能引发电击风险。质粒纯度、污染物质如盐、乙醇、蛋白和缓冲液等都会影响转化效率。电极杯中的离子也可能增加电导,因此要特别谨慎。对于大质粒,建议使用高纯质粒提取试剂盒。同时,连接产物的浓度和体积管理也很重要,过高会降低转化效率并增加放电风险。
最后,小心操作以避免细胞膜受损,尤其是处理高浓度质粒或连接产物时。正确的储存温度(-80℃)也是维持转化效率的关键。
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