5分钟讲透:荧光原位杂交技术步骤和注意事项

随着医学领域的革新，荧光原位杂交技术在病理学的舞台上崭露头角，成为了分子病理学中的重要工具。今天，我们就来详细解读这项技术的步骤和关键注意事项，以便更好地理解和应用。

一、荧光原位杂交（FISH）：探秘分子病理学新星

FISH，全称Fluorescence in situ hybridization，它的诞生是细胞遗传学与DNA技术结合的创新之作。作为上世纪八十年代末的产物，它在放射性核酸探针的基础上，发展出无放射性的非放射性原位杂交技术，大大提高了精准度和便捷性。

二、FISH工作原理揭秘

其核心原理基于碱基互补配对，通过DNA变性和复性，荧光标记的探针与目标DNA紧密结合。探针如同一把钥匙，与细胞核中特定的DNA区域精确匹配，通过荧光显微镜，我们就能一窥其究竟。

具体操作如下：

荧光标记：特异性DN*段（探针）被荧光素标记，犹如探照灯照亮目标。
原位定位：目标DNA位于细胞核内的特定位置，等待荧光探针的“亲吻”。
杂交结合：探针与DNA或RNA的特定区域完美契合，形成荧光信号。

三、FISH在医学实践中的价值

在肿瘤治疗中，FISH的重要性不言而喻。靶向治疗的精准实施依赖于基因检测，FISH作为基因检测的主力军，为个性化治疗提供了关键信息。例如，HER2基因扩增的乳腺癌患者，FISH能帮助确定是否适合赫赛汀治疗。

四、报告中的信号解读

FISH报告中的红绿荧光信号代表了不同类型的探针：绿色和红色分别标记特定染色体或基因区域。LSI探针按类型区分，计数探针对染色体异常进行计数，融合/分离探针则揭示基因重排和断裂情况。

五、FISH在临床应用的广泛性

FISH的实用价值体现在多个方面，从指导药物选择（如HER2扩增患者的治疗决策），到鉴别诊断（如IDH突变和染色体缺失的鉴别），再到预后评估和辅助病理诊断。例如，MDM2基因扩增在脂肪肉瘤诊断中起关键作用，EWSR1断裂则对尤文肉瘤有重要提示意义。

六、FISH实验流程速览

从烤片、脱蜡，到酶消化、洗涤，每一步都是精确到毫厘的科学操作。变性杂交、洗涤复染，最后是等待7天左右的报告出炉，每一步都不可或缺。

总的来说，FISH以其高精度、快速和直观的优势，成为了现代医学领域中不可或缺的诊断工具。它不仅在癌症鉴别和辅助诊断中发挥着关键作用，还在个体化治疗决策中扮演着重要角色，让医学实践更加精准和高效。

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