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细菌内毒素检测方法与操作

革兰氏阴性细菌的细胞壁中存在脂多糖（LPS），即细菌内毒素。当内毒素进入血液或CSF（脑脊液）时，会引起发热现象，因此被称作热原。在发布无菌产品前，进行细菌内毒素检测至关重要，尤其是在制药行业。这些测试确保了药物和医疗设备在使用前的内毒素安全性，对于降低患者交叉感染风险至关重要。热原或细菌内毒素测试是FDA批准的检测热源元素（如内毒素）的方法。

细菌内毒素检测方法主要包括细菌内毒素试验（BET）、鲎变形细胞裂解物（LAL）测定、重组因子C（rFC）测定、单核细胞活化试验（MAT）和兔热原试验（RPT）。每种方法都有其特定的应用场景和操作流程。

兔热原试验（RPT）是一种较为传统的检测方法，通过将待测样品注射到多只兔子体内，观察是否引发发热反应。然而，由于涉及动物试验，RPT正被MAT和LAL测定广泛取代。

LAL测定是基于鲎变形细胞裂解物的体外检测方法，是所有国际药典中使用最广泛和推荐的内毒素检测方法。其原理是LAL试剂中的酶原与脂多糖（一种革兰氏阴性细菌内毒素）反应，形成凝块，然后通过凝胶凝块、比色分析、分光光度分析或显色测定进行结果分析。

重组因子C（rFC）检测基于内毒素结合激活重组C因子，导致合成底物裂解产生荧光化合物，然后使用ELISA检测，结果与内毒素浓度成正比。

单核细胞活化试验（MAT）则检测细胞因子和前列腺素等物质的释放，通过ELISA定量分析，不仅检测内毒素热源，还能识别非内毒素热源。

总的来说，细菌内毒素检测方法多样，每种方法都有其优势和限制。选择合适的检测方法需要考虑样品类型、检测需求、成本和可用资源等因素。

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