病毒包装 | 腺相关病毒(AAV)包装流程详解

重组腺相关病毒（rAAV）的生产主要基于三质粒系统（核心质粒、血清型质粒、辅助质粒）在HEK293T细胞中的共转染。此过程在辅助质粒的帮助下，有效将带有内部重复末端（ITR）的目的DNA片段包装到rAAV病毒颗粒中，产生结构蛋白Cap和功能蛋白Rep。

首先，构建rAAV载体，根据实验需求选择载体，通过酶切-连接-转化-测序方法克隆目的基因，并验证载体的表达功能。接着，进行高质量、高浓度且低内毒素含量的质粒DNA纯化，确保生产过程的纯净度。

接着进行病毒包装流程，包括细胞准备、质粒转染、细胞培养、病毒收毒及除杂，以及病毒纯化与浓缩。在细胞准备阶段，复苏并培养细胞至合适密度后进行转染。转染后，观察细胞转染情况，确保转染效率达到80%以上。病毒收毒及除杂步骤包括低温离心去除细胞碎片，加入核酸酶去除游离核酸，利用PEG8000/NaCl溶液过夜聚沉，进一步纯化与浓缩。

最后，对腺相关病毒进行质量检测，包括滴度检测、纯度检测、无菌检测、支原体检测及内毒素检测，确保病毒的品质符合要求。

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