病毒包装实验(一)

在基因工程中，将目的基因有效地传输到真核细胞是关键。为了实现这一目标，常用病毒作为载体进行基因包装，其中两种常见方法是慢病毒和腺病毒。

慢病毒，作为一种逆转录病毒，其siRNA/miRNA载体能感染难以常规转染的细胞，如原代细胞和非分裂细胞。构建流程包括：构建载体、转染病毒包装细胞、培养后收集病毒、纯化和储存。慢病毒通过整合到细胞基因组，实现长期稳定表达。

腺病毒，无包膜的双链DNA病毒，有多种血清型，如Ad2和Ad5。它通过替换E1和E3基因，实现低复制力的基因转递。其特点包括广泛感染性、高滴度和生物安全性高。包装流程包括构建载体、转染293A细胞、扩增病毒和储存。

慢病毒与腺病毒的比较中，两者都涉及构建目的基因载体，但方法可能有所不同。慢病毒通常依赖酶切和连接技术，而腺病毒可能需要PCR扩增。质粒载体，如能在细菌中自我复制的环状DNA，是构建这些载体的基础。

在实际操作中，如pspax2, pMD2G, pLVX-IRES-ZsGreen1/pLVX-shRNA2三质粒系统用于慢病毒克隆，质粒DNA通过转化大肠杆菌实现扩增和提取，涉及细胞制备、感受态细胞制备、DNA转化及质粒纯化等步骤。

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